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摘 要： 血管生成素?2(Angiopoietin?2，Ang?2)作為血管生成素家族(Angiopoietins,Angs)重要成員之一，在腫瘤血管生成中發(fā)揮調(diào)節(jié)作用。我們采用免疫組織化學(xué)方法對(duì)食管鱗癌組織標(biāo)本中的Ang?2進(jìn)行檢測(cè),旨在探討其與食管鱗癌病理分級(jí)及浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移之間的關(guān)系。
【關(guān)鍵詞】 血管生成素?2 食管腫瘤 血管形成 免疫組織化學(xué)
【Abstract】 Objective To investigate the expression of angiopoietin?2 (Ang?2) in human squamous carcinoma of esophagus and determine it‘s relationship with pathological grades, infiltration and metastasis factors. Methods S?P immunochemical method was performed to detect the expression of Ang?2 in esophagus tissues from 54 cases with squamous carcinoma of esophagus and 22 normal persons. The pathological grades, infiltration and metastasis factors were statistically analyzed. Results Of 54 cases with squamous carcinoma of esophagus, 37 cases had positive expression of Ang?2, with positive rate of 67.06%, which was significantly higher than that in normal esophagus (P<0.05). The expression rate of Ang?2 increased significantly with the increase of pathological grading and lymphatic metastasis (P<0.05). Conclusions The expression of Ang?2 may be positively related to clinical stages and pathological grades in squamous carcinoma of esophagus, indicating that Ang?2 may be involved in the neovascularization of carcinoma and in the occurrence and progression of squamous carcinoma of esophagus and hence can be a useful biological predictor of progression in esophageal carcinoma.
【Key words】 Angiopoietin?2; Squamous carcinoma of esophagus; Angiogenesis; Immunohistochemistry
血管生成素?2(Angiopoietin?2，Ang?2)作為血管生成素家族(Angiopoietins,Angs)重要成員之一，在腫瘤血管生成中發(fā)揮調(diào)節(jié)作用。我們采用免疫組織化學(xué)方法對(duì)食管鱗癌組織標(biāo)本中的Ang?2進(jìn)行檢測(cè),旨在探討其與食管鱗癌病理分級(jí)及浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移之間的關(guān)系。
1 資料和方法
1.1 臨床資料
收集我院2005年10月至2006年3月行電子胃鏡檢查發(fā)現(xiàn)的原發(fā)性食管鱗狀細(xì)胞癌患者85例，其中男63例，女22例;年齡41～76歲，平均59.0歲。病理分級(jí)采用常用3級(jí)分級(jí)法[1]，其中Ⅰ級(jí)50例、 Ⅱ級(jí)27例、Ⅲ級(jí)8例。另選22例正常食管組織標(biāo)本作對(duì)照。所有標(biāo)本經(jīng)10%甲醛溶液固定后常規(guī)石蠟包埋，制備成5 μm厚的連續(xù)切片，用于免疫組織化學(xué)染色，并做常規(guī)蘇木精?伊紅染色，病理證實(shí)診斷。患者病理組織活檢及術(shù)前均未接受任何放療或化療。
1.2 主要試劑和方法
羊抗人Ang?2(N?18)多克隆抗體為Santa Cruz公司產(chǎn)品，工作濃度1∶100。S?P免疫染色試劑盒購(gòu)自北京中山生物公司。實(shí)驗(yàn)方法：經(jīng)10%甲醛固定標(biāo)本，石蠟包埋后切片，一抗為1∶100 Ang?2多克隆抗體，二抗為生物素標(biāo)記兔抗山羊IgG，三抗為ABC復(fù)合物，DAB液顯色，蘇木精復(fù)染，以PBS緩沖液代替一抗作空白對(duì)照，用已知的大腸癌陽(yáng)性片作為陽(yáng)性對(duì)照。
1.3 結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn)
采用Ang?2陽(yáng)性染色強(qiáng)度結(jié)合陽(yáng)性細(xì)胞所占百分比作為判斷標(biāo)準(zhǔn)。在400倍顯微鏡視野下每張切片隨機(jī)觀察4個(gè)視野，將切片中平均陽(yáng)性細(xì)胞比例及染色深淺分別記0～3分。切片中無陽(yáng)性細(xì)胞為0分，陽(yáng)性細(xì)胞<25%為1分，陽(yáng)性細(xì)胞25%～50%為2分，陽(yáng)性細(xì)胞>50%為3分;染色深度以多數(shù)細(xì)胞為準(zhǔn)，無陽(yáng)性細(xì)胞為0分，淡黃色顯色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分。再按這兩項(xiàng)指標(biāo)的積分相加將結(jié)果分為4級(jí)：0分為“-”;1～2分為“+”;3～4分為“?”;5～6分為“?”。其中“?”、“?”為強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)。
1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
用SPSS 10.0統(tǒng)計(jì)軟件行χ2檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
2 結(jié)果
2.1 Ang?2在食管鱗癌組織及正常食管組織中陽(yáng)性染色結(jié)果及分布
在食管癌組織中， Ang?2的陽(yáng)性表達(dá)率為67.06%，陽(yáng)性染色細(xì)胞呈棕黃色顆粒狀或線網(wǎng)狀染色，分布于胞質(zhì)及胞膜，部分微小血管也可見Ang?2著色(圖1)。在正常食管黏膜組織中Ang?2多為陰性表達(dá)，少數(shù)為弱陽(yáng)性表達(dá)(表1)。結(jié)果示Ang?2的表達(dá)在食管癌組織及正常組織之間比較，兩者間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。提示食管癌組織中Ang?2呈高表達(dá)。表1 食管鱗癌組織及正常食管組織中Ang?2表達(dá)組織類型
2.2 Ang?2的表達(dá)與食管鱗癌病理分級(jí)及浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移的關(guān)系
Ang?2表達(dá)有明顯的異質(zhì)性，強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)的癌細(xì)胞常位于浸潤(rùn)前緣或癌組織的邊緣，也有少量成纖維細(xì)胞和血管內(nèi)皮細(xì)胞等間質(zhì)細(xì)胞表達(dá)陽(yáng)性;正常對(duì)照組只有少數(shù)呈弱陽(yáng)性表達(dá)。Ang?2在不同病理分級(jí)中表達(dá)陽(yáng)性率比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，且Ang?2表達(dá)的陽(yáng)性率與浸潤(rùn)深度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。提示Ang?2陽(yáng)性表達(dá)率隨食管癌病理分級(jí)上升而升高(表2)。表2 食管鱗癌中Ang?2的表達(dá)與腫瘤病理分級(jí)及其浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移的關(guān)系
3 討論
腫瘤性血管是一種高度不成熟的血管。它的生成需要依賴于腫瘤組織產(chǎn)生的促血管生成因子的作用，克服維持血管穩(wěn)定的諸多因素，包括離斷血管周細(xì)胞、破壞血管生成的微環(huán)境及刺激內(nèi)皮細(xì)胞的增生和遷移。在眾多的促血管生成因子中，血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)和Angs是現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)的內(nèi)皮細(xì)胞特異性因子，在控制血管生成過程中起著主導(dǎo)作用。Angs是惟一含受體激動(dòng)劑及抑制劑的促血管生成因子，編碼4種結(jié)構(gòu)相似的蛋白質(zhì)，包括Ang?1、Ang?2、Ang?3和Ang?4，均能與內(nèi)皮細(xì)胞膜上的酪氨酸激酶?2 (tyrosine kinase with immunoglobulin and epidermal growth factor homology domains?2，Tie2)特異性結(jié)合，作為調(diào)節(jié)血管穩(wěn)定的信號(hào)，參與生理性及病理性的血管生成[2]。Angs家族中Ang?2基因定位于第8號(hào)染色體短臂上(8p23)，相對(duì)分子質(zhì)量接近75 000。
天然的Ang?2是Ang?1拮抗劑，與受體Tie2結(jié)合，不能引起后者的磷酸化，從而可作為阻斷血管穩(wěn)定的信號(hào)，離斷血管內(nèi)皮細(xì)胞與周細(xì)胞的結(jié)合，引起血管的不穩(wěn)定，使其更易接受其他促血管生成因子的刺激，在后者的共同作用下，引起腫瘤的血管生成，從而促進(jìn)腫瘤的生長(zhǎng)。目前研究[3-4]認(rèn)為，Ang?1的表達(dá)與腫瘤血管形成的多少關(guān)系不大，而Ang?2表達(dá)是腫瘤血管新生起始及加強(qiáng)的因素，與腫瘤血管形成數(shù)目、臨床分期、預(yù)后關(guān)系密切。Peng等[5]在研究Ang?1和Ang?2在肝細(xì)胞癌異位表達(dá)中的生物學(xué)效應(yīng)中認(rèn)為血管生成素基因參與了肝細(xì)胞癌生長(zhǎng)與演進(jìn)，但Ang?1基因的表達(dá)沒有明顯增加腫瘤血管生長(zhǎng)的作用，而Ang?2能促進(jìn)腫瘤的血管生成。
Koga等[6]運(yùn)用免疫組化技術(shù)檢測(cè)Ang?2在膠質(zhì)瘤中的表達(dá)時(shí)發(fā)現(xiàn)Ang?2不僅表達(dá)在血管內(nèi)皮細(xì)胞上，腫瘤細(xì)胞亦有表達(dá)，高表達(dá)的部位位于腫瘤周邊的血管生成區(qū)。Ang?2在參與腫瘤血管生成中的具體作用機(jī)制尚不清楚。陳林鶯等[7]在Ang?2對(duì)胃癌血管生成的雙向效應(yīng)研究中發(fā)現(xiàn)Ang?2對(duì)胃癌血管生成具有雙向調(diào)節(jié)作用，即在Ang?2表達(dá)上調(diào)的情況下VEGF促進(jìn)血管生成，而Ang?2抑制血管生成則與VEGF的表達(dá)無相關(guān)性。
本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，食管鱗癌組織中Ang?2的表達(dá)明顯高于正常組織，且食管鱗癌中Ang?2蛋白表達(dá)與其病理分級(jí)、浸潤(rùn)程度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。腫瘤分化越差，Ang?2表達(dá)越強(qiáng)。有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的Ang?2陽(yáng)性率明顯高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組，這說明Ang?2與腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移關(guān)系密切。Ang?2不僅在腫瘤相關(guān)血管的內(nèi)皮細(xì)胞中有表達(dá)，而且在食管鱗癌組織中亦有表達(dá)，表明來源于腫瘤細(xì)胞的Ang?2很有可能參與了腫瘤血管的退化及新生血管的成熟。Ang?2在腫瘤組織中表達(dá)明顯高于正常組織，特別是Ang?2特異表達(dá)于腫瘤邊緣的血管重建區(qū)，參與腫瘤血管新生的起始及延續(xù)過程，影響腫瘤生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移，并有望成為一種新的抗腫瘤血管新生靶向因子。其表達(dá)調(diào)控及活性調(diào)節(jié)的研究是目前闡明腫瘤血管新生機(jī)制并進(jìn)行抗腫瘤血管新生治療的研究熱點(diǎn)及難點(diǎn)，所以這一研究仍有待于進(jìn)一步深入。
【參考文獻(xiàn)】
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