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摘 要： [摘要]目的建立HPLC測定人血漿中鹽酸氨溴索含量的方法。方法選用DiamonsilC柱(200mnlx4.6inm，5m)，流動相：甲醇一0.01mol/L磷酸鹽緩沖液(pH7.0)一四氫呋喃(700：320：25，v/v/v)，流速：1.2ml/min，檢測波長：242nnl，柱溫：室溫。結(jié)果該方法低、中、高3種
[摘要]目的建立HPLC測定人血漿中鹽酸氨溴索含量的方法。方法選用Diamonsil—C柱(200mnlx4.6inm，5m)，流動相：甲醇一0.01mol/L磷酸鹽緩沖液(pH7.0)一四氫呋喃(700：320：25，v/v/v)，流速：1.2ml/min，檢測波長：242nnl，柱溫：室溫。結(jié)果該方法低、中、高3種濃度的提取回收率為88.2%～104.8%，日內(nèi)、日間相對標準差為2.7%～5.3%(n=6)，在l0.2～610.8ng/ml范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。結(jié)論本法簡便、靈敏、專屬性強，能滿足含量測定及體內(nèi)藥代動力學(xué)研究的需要。
[關(guān)鍵詞]鹽酸氨溴索;高效液相色譜;血藥濃度
氨溴索為溴己新的活性代謝產(chǎn)物，能促進肺表面活性物質(zhì)的分泌及氣道液體分泌，促進黏痰溶解，顯著降低痰黏度，增強支氣管黏膜纖毛運動，促進痰液排除，改善通氣功能和呼吸困難狀況，主要用于急、慢性呼吸道疾病引起的痰液黏稠、咳痰困難等。本研究參考相關(guān)文獻，建立了測定鹽酸氨溴索血藥濃度的高效液相色譜方法。采用該方法以上海勃林格殷格翰藥業(yè)有限公司生產(chǎn)的鹽酸氨溴索片(商品名：沐舒坦@)為參比制劑，研究上海衡山藥業(yè)有限公司生產(chǎn)的鹽酸氨溴索片的人體生物等效性。。
1材料
1.1儀器LC一10ATVP型高效液相色譜，包括SPD.10AVP紫外檢測器，色譜工作站(日本島津公司);TDZ4臺式自動平衡離心機(長沙平凡儀器儀表有限公司);XW一80A微型渦旋混合儀(上海滬西分析儀器廠有限公司);FA1004電子天平(上海恒平科學(xué)儀器有限公司)。
1.2藥品與試劑受試制劑：鹽酸氨溴索片(上海衡山藥業(yè)有限公司，規(guī)格：每片30mg，批號：080301);參比制劑：鹽酸氨溴索片(上海勃林格殷格翰藥業(yè)有限公司，規(guī)格：每片30mg，批號：784079);鹽酸氨溴索對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號：100599—200502，純度：99.4%);內(nèi)標：酮康唑?qū)φ掌?中國藥品生物制品檢定所，批號：100294—199801);甲醇、四氫呋喃為色譜純，磷酸等均為分析純。
2方法與結(jié)果
2.1樣品處理精密量取血漿500Ixl置于離心管中，加入內(nèi)標溶液(2.0420Ixg/m1)100txl，甲醇一水(1：1，v/v)1001xl，再分別加入0.01mol/L磷酸鹽緩沖液(pH10.0)0.5ml和乙醚4.0ml，封口后振蕩1min，渦旋混合60s，離心6min(3500rpm)，醚層轉(zhuǎn)至另一離心管中，加入0.01mol/L鹽酸200txl，渦旋混勻60s，離心6min(3500r/min)，棄去醚層，酸層取501進樣分析。
2.2試驗條件色譜柱：Diamonsil—C.8柱(200mm×4.6mill，5m);流動相：甲醇一0.01mol/L磷酸鹽緩沖液(pH7.0)一四氫呋喃(700：320：25，v/v/v);流速：1.2ml/min;柱溫：室溫;進樣量：50txl;檢測波長：242nm。
2.3鹽酸氨溴索對照品溶液的配制精密稱取鹽酸氨溴索對照品10.18mg，置100ml量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成濃度為101.8m1的鹽酸氨溴索儲備液。
2.4內(nèi)標溶液的配制精密稱取酮康唑?qū)φ掌?0.21mg，置100ml量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成濃度為10.21mg/ml的內(nèi)標儲備液;精密量取1.0ml內(nèi)標儲備液置50m1量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，即得濃度為2.0420Ixg/ml的內(nèi)標溶液。以上均需避光操作。
2.5專屬性試驗在“2.2”項分析測試條件下，血漿中氨溴索和內(nèi)標酮康唑的保留時間分別為9.9min和11.7rain，血漿中內(nèi)源性物質(zhì)不干擾鹽酸氨溴索和內(nèi)標物酮康唑的測定。色譜見圖1。
2.6線性范圍及定量下限精密量取空白血漿500l，分別精密加入鹽酸氨溴索系列標準溶液100txl，配制成血漿中鹽酸氨溴索濃度為10.2、20.4、50.9、152.7、305.4、509.0、6l0.8ng/ml的血漿樣品，按“2.1”項下同法操作，并進行色譜分析。以鹽酸氨溴索與內(nèi)標的峰面積比對鹽酸氨溴索濃度進行線性回歸，結(jié)果表明，鹽酸氨溴索在10.2～610.8ng/ml范圍內(nèi)與待測物和內(nèi)標物峰面積之比線性關(guān)系良好，定量下限為10.2ng/ml。用加權(quán)(W=1/X)最小二乘法進行回歸運算，得回歸方程為：Y=0.00203×+0.00082.r=0.9985
2.7精密度與準確度精密量取空白血漿500Ixl，分別精密加入不同濃度的鹽酸氨溴索標準溶液100l，配制成血漿中鹽酸氨溴索濃度為20.4、l52.7和509.0ng/ml的血漿樣品(每個濃度6份樣本分析)，按“2.1”項下同法操作，連續(xù)測定3批(與標準曲線同時進行)，計算血漿樣品的濃度，求得方法的準確度與精密度。日內(nèi)精密度RSD分別為2.7%，5.3%，2.0%;日間精密度RSD分別為5.1%，4.4%，1.2%。
2.8提取回收率精密量取空白血漿500l，分別精密加入不同濃度的鹽酸氨溴索標準溶液1001，配制成血漿中鹽酸氨溴索濃度為20.4、152.7和509.0ng/ml的血漿樣品(每個濃度3份樣本分析)，按“血漿樣品處理方法”項下同法試驗，獲得相應(yīng)色譜峰面積;另取對應(yīng)濃度的鹽酸氨溴索標準溶液各100l，加入酮康唑內(nèi)標溶液100l，配制成與血漿樣品處理后濃度一致的體外樣品，取501進樣分析，獲得相應(yīng)色譜峰面積(3次測定的平均值)。以每一濃度兩種處理方法的峰面積比值計算提取回收率。詳見表1。
2.9穩(wěn)定性考察用空白血漿配制血漿標準樣品各3份，按“2.1”項方法及“2.2”項條件進行處理和分析，考察血漿樣品預(yù)處理后室溫放置24h、3次凍融循環(huán)的穩(wěn)定性，一70。c14d冷凍條件下及儲備液的穩(wěn)定性，平均RSD值均<10%。結(jié)果表明，血漿標準樣品及儲備液在上述條件下穩(wěn)定性良好。
2.10應(yīng)用20例健康男性自愿者，年齡(23.3±1.9)歲，體重(61.8±5.5)kg，身高(1.7l±0.05)1TI。試驗前，所有志愿者經(jīng)血壓、心電圖、胸透、血常規(guī)、尿常規(guī)、肝腎功能檢查正常，充分了解試驗內(nèi)容后均自愿簽署知情同意書。受試者隨機分為2組，禁食10h后，于次日晨空腹口服參比制劑或受試制劑90mg。給藥前采血1次，給藥后的0.25、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、4.0、6.0、8.0、l2.0、24.0h取靜脈血5ml，置肝素化試管中，離心，分離血漿。按“2.1”項下方法操作，測定血漿中鹽酸氨溴索的濃度，平均藥時曲線見圖2，主要藥代動力學(xué)參數(shù)見表2。
3討論
鹽酸氨溴索體內(nèi)濃度低，本測定采用液一液萃取的方法用乙醚提取血漿樣品，再用0.01mol/[鹽酸反提回水相，可以減少人血漿內(nèi)源性雜質(zhì)的干擾。因樣品吸附作用很強，在試驗中易造成峰拖尾，出峰時間長，故于流動相中加入四氫呋喃以改善峰形，減少出峰時間。本方法靈敏，專屬性強，能滿足鹽酸氨溴索的含量測定及體內(nèi)藥動學(xué)研究的需要。
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