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摘 要： 醫(yī)學(xué)論文"葡萄糖激酶基因啟動子－30位點(diǎn)PCR擴(kuò)增的實(shí)驗(yàn)條件研究 論文發(fā)表"已完成論文發(fā)表流程，為保證"葡萄糖激酶基因啟動子－30位點(diǎn)PCR擴(kuò)增的實(shí)驗(yàn)條件研究 論文發(fā)表"論文的版權(quán)，不能夠完整瀏覽…… [申請瀏覽] 主要儀器：PE9600基因擴(kuò)增儀；BIO-RAD Power P
醫(yī)學(xué)論文"葡萄糖激酶基因啟動子－30位點(diǎn)PCR擴(kuò)增的實(shí)驗(yàn)條件研究 論文發(fā)表"已完成論文發(fā)表流程，為保證"葡萄糖激酶基因啟動子－30位點(diǎn)PCR擴(kuò)增的實(shí)驗(yàn)條件研究 論文發(fā)表"……
主要儀器：PE9600基因擴(kuò)增儀；BIO-RAD Power Pac 3000型電泳儀；Mini-PROTEIN Ⅱ型電泳槽及Gel Doc 1000紫外圖像分析系統(tǒng)；TJ－6型低溫離心機(jī)；430 pH計(jì)；p10, p100微量加樣器。
主要試劑：5O D 260的寡核苷酸引物；100m m ol/L的dNTP；低熔點(diǎn)瓊脂糖；5U/μl的Taq酶。
1.2 方法
模板的準(zhǔn)備：本文使用的模板是從人體白細(xì)胞中應(yīng)用酚/氯仿/異戊醇提取的基因組DNA [1]。提取的模板用100μl TE緩沖液，60℃加熱10－15分鐘溶解后，-20℃冰凍保存。
目的片段的擴(kuò)增：寡核苷酸引物根據(jù)文獻(xiàn)報道設(shè)計(jì)：上游引物為5’-CAAGGCGATTGAGTGGTCACCATG-3’，下游引物為5’-GACTGTGTCTCTCACATCCTAGCC-3’，擴(kuò)增片段長度為258個堿基。反應(yīng)體系中模板1μl，10×緩沖液3μl，加雙蒸水至30μl條件不變，分別變化Taq酶、dNTP、引物、Mg 2+的濃度，按94℃預(yù)變性5min，后94℃1min，60℃1min，72℃1min進(jìn)行35個循環(huán)，最后72℃延伸5min。用2％瓊脂糖凝膠電泳，透射式紫外燈下觀察擴(kuò)增產(chǎn)物片段。
2 結(jié)果
2.1 PCR實(shí)驗(yàn)條件 論文發(fā)表
2.1.1通常PCR實(shí)驗(yàn)的酶用量范圍為0.5U-2U。其他擴(kuò)增條件不變的情況下設(shè)定系列Taq酶量0.5～5U之間。
結(jié)果表明，均可以擴(kuò)增出目的DNA，產(chǎn)物量之間并無差異，但5U時出現(xiàn)非特異性擴(kuò)增。為了使以后擴(kuò)增更加有效，選擇Taq酶量為1U。
2.1.2通常引物的濃度常用的范圍為0.1-1μmol/L。高濃度的引物可能會引起反應(yīng)的錯配或非特異性產(chǎn)物。其他擴(kuò)增條件不變的情況下設(shè)定系列引物濃度，范圍設(shè)計(jì)在0.1～1μmol/L的濃度之間。結(jié)果表明，均有產(chǎn)物擴(kuò)出，引物二聚體的濃度依次增加，但引物濃度超過0.3μmol/L時產(chǎn)物量接近最高而二聚體的濃度相對低；當(dāng)?shù)竭_(dá)1μmol/L時二聚體明顯過剩，產(chǎn)物量反而降低；選擇引物二聚體較少而產(chǎn)物量高時的引物濃度0.3μmol/L為最佳濃度。
2.1.3一般反應(yīng)中每種dNTP的最終濃度可為20-200μm
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一、概況 由于我國人民生活水平低和衛(wèi)生資源潰乏，造成乙肝泛濫。據(jù)統(tǒng)計(jì)：我國有乙肝病毒攜帶者約1.5億、慢性遷延性肝炎約2500萬、慢性活動性肝炎約1000萬、重癥肝炎約150萬、肝硬化約100萬和肝癌16～30萬。肝硬化和肝癌80%以上是由乙肝病毒引起，而且80%左
【摘要】基因工程在診