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摘 要： 摘要:目的建立UPLC波長變換測定地榆中沒食子酸和鞣花酸的方法，并對游離和水解樣品中的成分進行分析。方法采用UPLC法，色譜柱為ACQUITYUPLCBEHC18柱(2.1mm50mm，1.7m)，流動相為乙腈-0.1%磷酸，進行梯度洗脫。結果沒食子酸和鞣花酸的平均回收率分別為97.9%和
摘要:目的建立UPLC波長變換測定地榆中沒食子酸和鞣花酸的方法，并對游離和水解樣品中的成分進行分析。方法采用UPLC法，色譜柱為ACQUITYUPLCBEHC18柱(2.1mm×50mm，1.7μm)，流動相為乙腈-0.1%磷酸，進行梯度洗脫。結果沒食子酸和鞣花酸的平均回收率分別為97.9%和99.8%，RSD分別2.1%和1.6%(n=6)。結論所建立的方法穩定、準確、可靠，游離沒食子酸和鞣花酸更適合作為地榆飲片的質量控制指標。
關鍵詞:地榆;沒食子酸;鞣花酸;超高效液相色譜
地榆為薔薇科植物地榆SanguisorbaofficnalisL.或長葉地榆SanguisorbaofficinalisL.var.longifolia(Bert.)YuetLi的干燥根[1]。地榆始載于《神農本草經》，列為中品，其味苦、酸、澀，性微寒。歸肝、大腸經。具有涼血止血，解毒斂瘡的功效，用于治療便血，痔血，血痢，崩漏，水火燙傷，癰腫瘡毒等[1，2]。地榆主要化學成分為鞣質和三萜類化合物，此外還有黃酮類、蒽醌類化合物[3，4]。
一般認為鞣質是地榆止血作用的主要活性成分[5]，但是實驗表明口服給予實驗動物大分子的單寧酸，止血作用較差;而沒食子酸和鞣花酸具有較好的止血活性[6，7]，故小分子的鞣質類成分是與其止血功效密切相關的物質基礎。因此建立地榆中游離沒食子酸和鞣花酸的含量測定方法，為優選更合理的地榆質控指標提供依據。
1儀器與試藥
1.1儀器WatersH-classUPLC全自動高效液相色譜儀(含PDA檢測器);XS205D1/10萬電子天平(梅特勒托利多);LC-350A型超聲波中藥處理機(濟寧市中區魯超儀器廠)。
1.2試藥沒食子酸對照品(批號:110831-201302)購自中國藥品生物制品檢定所、鞣花酸對照品(批號10149850)購于美國阿法埃莎(AlfaAesar);乙腈(色譜純)購于美國默克，磷酸(色譜純)購于天津科密歐化學試劑有限公司，甲醇(分析純)購于天津富宇精細化工有限公司。屈臣氏蒸餾水。
藥材:市售地榆飲片，經本院中藥資源研究室林慧彬研究員鑒定為薔薇科植物地榆SanguisorbaofficinalisL.的干燥根。
2方法與結果
2.1色譜條件色譜柱:ACQUITYUPLCBEHC18柱(1.7μm，2.1mm×50mm);流動相:A乙腈，B為0.1%磷酸水(0～0.7min，A1.5%→4%;0.7～1.7min，A4%→30%;1.7～3.5min，A30%→40%，3.5～5min，A40%→50%)。流速:0.6ml·min-1;柱溫35℃。波長:270nm/252nm。進樣量:0.5μl。在上述色譜條件下，沒食子酸、鞣花酸對照品和供試品的色譜圖見圖1、圖2。
2.2溶液制備
2.2.1對照品溶液的制備分別精密稱取沒食子酸、鞣花酸對照品適量，加甲醇溶解，制成每毫升含沒食子酸0.10mg，鞣花酸0.45mg的溶液，即得。
2.2.2供試品溶液的制備稱取地榆粉末(過4號篩)約0.2g，精密稱定，置具塞三角瓶中，精密加入甲醇25ml，稱定重量，超聲處理40min，放涼，用甲醇補足減失的重量，搖勻，過濾，取續濾液，即得。
2.3線性關系考察分別吸取不同體積的沒食子酸對照品溶液，注入高效液相色譜中，測定，以對照品進樣質量(μg)為橫坐標，以峰面積為縱坐標，繪制出校正曲線，Y=5078154X-2979.6，相關系數R2=0.9999。結果表明，沒食子酸進樣量在0.0198～0.2376μg范圍內具有良好的線性關系。
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分別吸取不同體積鞣花酸對照品溶液，注入高效液相色譜中，測定，以對照品進樣質量(μg)為橫坐標，峰面積為縱坐標，繪制出校正曲線，Y=9175392X+9142.6，相關系數R2=0.9997。結果表明，鞣花酸進樣量在0.0123～0.1848μg范圍內具有良好的線性關系。
2.4精密度試驗按“2.1”項下色譜條件，將沒食子酸和鞣花酸對照品溶液重復進樣6次，每次0.5μl，測定沒食子酸的峰面積RSD為0.77%，鞣花酸的峰面積RSD為0.39%，表明精密度良好。
2.5穩定性試驗按“2.1”項下色譜條件，取供試品溶液，室溫條件下，分別在0，2，4，6，8，10，12，24h進樣并進行分析，測定峰面積。結果沒食子酸在24h內峰面積RSD為0.92%，鞣花酸在24h內峰面積RSD為0.84%，表明該供試品溶液至少在24h內穩定。
2.6重復性試驗精密稱取同一批次的地榆樣品粉末6份，按“2.2.2”項下制備供試品溶液，按“2.1”項下色譜條件精密吸取一定量的樣品溶液注入液相色譜儀，依法測定，計算沒食子酸和鞣花酸含量。結果沒食子酸和鞣花酸的含量分別為0.66%和0.89%，RSD分別為2.22%和2.17%，表明方法重復性良好。
2.7加樣回收率精密稱取已知含量的地榆樣品6份，分別加入沒食子酸和鞣花酸對照品溶液適量，按“2.2.2”項下制備供試品溶液，按“2.1”項下色譜條件，測定峰面積，計算沒食子酸和鞣花酸的平均加樣回收率，結果見表1，表2。
2.8樣品測定稱取地榆樣品粉末，按“2.2.2”項下制備供試品溶液，按“2.1”項下色譜條件，測定峰面積并計算各樣品中游離沒食子酸和鞣花酸的含量，見表3。
稱取地榆樣品粉末，按照《中國藥典》2015年版地榆項下沒食子酸含量測定方法，制備藥典法供試品溶液，按照，按“2.1”項下色譜條件，測定峰面積并計算各樣品中水解沒食子酸和鞣花酸的含量，見表3。
10批不同產地地榆飲片中，沒食子酸含量在0.07%～0.96%之間，鞣花酸含量在0.36%～1.28%之間;水解后沒食子酸含量在0.39%～4.65%之間，鞣花酸含量在0.09%～0.49%之間。
3結論
《中國藥典》2015年版地榆項下收載了沒食子酸的含量測定，其提取方法是以10%的鹽酸水解3h后，測定其水解產物中的沒食子酸含量，而本文所采用的提取方法是甲醇超聲提取，具有用時短，操作簡便的優點。由測定結果可知，藥典法制備的樣品中沒食子酸含量高于本文所建立的方法，原因是地榆中含有大量沒食子鞣質，在鹽酸的作用下，發生水解成了沒食子酸，使其含量升高;同時鞣花酸含量卻顯著降低，原因是鞣花酸的結構中含有酯鍵，在酸水加熱的條件下發生水解從而引起結構的變化。
采用UPLC法測定地榆中的沒食子酸和鞣花酸，最短可在3.5min內完成一次測定，大大節約了時間;通過波長變換的方法，可分別在沒食子酸和鞣花酸的最大吸收波長270nm和252nm進行測定，提高測定的準確度。
采用SPSS軟件對兩組數據進行正態分布檢驗，K-S結果sig.=0.2>0.05，均服從正態分布。10批不同產地地榆飲片游離沒食子酸平均含量為0.457%±0.298%，鞣花酸平均含量為0.763%±0.356%，離散度均較大，不同產地地榆游離沒食子酸含量相差極大，最高者是最低者的10倍以上，而鞣花酸含量相差3倍左右，表明各地產的地榆質量有較大差異。
一般認為鞣質是地榆止血作用的主要活性成分[5]，但是實驗表明口服給予實驗動物大分子的單寧酸，止血作用較差;而沒食子酸和鞣花酸具有較好的止血活性[6，7]，故小分子的鞣質類成分是與其止血功效密切相關的物質基礎。因此建立地榆中游離沒食子酸和鞣花酸的含量測定方法，制定合理的含量限度對于提升地榆質控指標具有重要意義。將地榆飲片游離沒食子酸和鞣花酸平均值下浮20%，分別為0.366%和0.610%，若作為其含量限度，10批地榆飲片中，2號、6號、7號、8號共四批樣品含量低于沒食子酸限度，2號、5號、6號、7號、8號共五批樣品地榆鞣花酸限度，因此在進一步實驗中，應擴大樣品量，為制定更合理的地榆質控標準提供數據支撐。