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摘 要： 摘 要：為研究氨氣與過氧乙酸戊二醛復(fù)方消毒劑(簡稱復(fù)方消毒劑)相互中和的效果及氨氣對消毒效果的影響，通過測定不同劑量512倍稀釋的復(fù)方消毒劑，在不同作用時間、不同氨氣濃度時，噴霧消毒前后氣霧柜內(nèi)細(xì)菌數(shù)量和氨氣質(zhì)量濃度，計算殺菌率和氨氣中和率，以
摘 要：為研究氨氣與過氧乙酸戊二醛復(fù)方消毒劑(簡稱復(fù)方消毒劑)相互中和的效果及氨氣對消毒效果的影響，通過測定不同劑量512倍稀釋的復(fù)方消毒劑，在不同作用時間、不同氨氣濃度時，噴霧消毒前后氣霧柜內(nèi)細(xì)菌數(shù)量和氨氣質(zhì)量濃度，計算殺菌率和氨氣中和率，以確定512倍稀釋的復(fù)方消毒劑對氨氣的中和效果及高濃度氨氣對其殺菌效果的影響。結(jié)果顯示：在氨氣質(zhì)量濃度為40.98mg/m3時，512倍稀釋的復(fù)方消毒劑分別以15、30、60mL/m3劑量噴霧，作用30min后，氨氣中和率分別為13.3%、17.8%、54.0%;在氨氣質(zhì)量濃度分別為40.98、48.57、56.16mg/m3時，512倍稀釋的復(fù)方消毒劑以15mL/m3噴霧消毒，作用30min后，殺菌率分別為100%、99.6%、99.2%。結(jié)果表明：在氨氣質(zhì)量濃度40.98mg/m3，作用30min后，512倍稀釋的復(fù)方消毒劑，噴霧劑量60mL/m3可實(shí)現(xiàn)理想的中和氨氣效果，15mL/m3可實(shí)現(xiàn)理想的消毒效果。
關(guān)鍵詞：過氧乙酸戊二醛復(fù)方消毒劑;氨氣濃度;空氣消毒;中和效果;殺菌效果
消毒劑可用于殺滅環(huán)境和傳播媒介上的病毒和細(xì)菌等病原微生物，以阻斷病原的傳播流行。合理使用消毒劑消毒是養(yǎng)殖場生物安全控制的一項(xiàng)非常重要的措施[1]。消毒劑種類以及殺菌效果好壞，會直接影響畜禽養(yǎng)殖環(huán)境的生物安全，從而影響動物和人的健康與安全。某些畜禽養(yǎng)殖業(yè)消毒不規(guī)范，導(dǎo)致很多病原微生物對單一化學(xué)成分的消毒劑產(chǎn)生了較強(qiáng)的抵抗力[2]。而各類消毒劑合理復(fù)配后，其殺菌作用遠(yuǎn)大于單一種類消毒劑。過氧乙酸戊二醛復(fù)方消毒劑(簡稱復(fù)方消毒劑)是一種低成本、高效、抗干擾的復(fù)方消毒劑，具有殺菌范圍廣和有效使用濃度低等優(yōu)點(diǎn)[3]。
畜禽舍中的氨氣主要來源于兩方面：一是從動物胃腸道排出;二是堆積的排泄物和舍內(nèi)的墊料等有機(jī)物質(zhì)，經(jīng)過微生物分解而產(chǎn)生[4]。畜禽舍內(nèi)氨氣的大量存在會對動物健康造成傷害。研究[5]發(fā)現(xiàn)：當(dāng)雞舍內(nèi)氨氣質(zhì)量濃度達(dá)到15.18mg/m3時，雞群食欲會明顯下降，其生產(chǎn)性能及對抗各種疾病的抵抗力也會降低或減弱;當(dāng)氨氣質(zhì)量濃度達(dá)到37.95mg/m3時，雞只死亡率會明顯增加。已有研究[6-7]表明，雞舍內(nèi)氨氣平均質(zhì)量濃度為18.58~36.07mg/m3。黃曉露等[8]發(fā)現(xiàn)，封閉式仔豬高床保育舍內(nèi)的氨氣質(zhì)量濃度為30.36~32.63mg/m3;詹凱等[9]研究發(fā)現(xiàn)，豬舍內(nèi)氨氣質(zhì)量濃度可達(dá)24.77mg/m3。總之，畜禽舍內(nèi)氨氣質(zhì)量濃度一般不超過40mg/m3。我國農(nóng)業(yè)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)[10]規(guī)定的畜舍環(huán)境中日均氨氣質(zhì)量濃度為：雛雞舍不超過10mg/m3，成年雞舍不超過15mg/m3，豬舍不超過25mg/m3，牛舍不超過20mg/m3。因此，必須及時清除養(yǎng)殖場舍中的氨氣，使其降至合理的范圍內(nèi)。降低畜舍內(nèi)氨氣濃度的方法，除了減少氨氣排放外，還可以通過化學(xué)方法，如噴灑過氧乙酸，其機(jī)理在于兩者能夠結(jié)合形成醋酸銨，同時還能達(dá)到消毒的效果[11]。
相關(guān)期刊推薦：《中國動物檢疫》雜志創(chuàng)辦于1982年，由中華人民共和國農(nóng)業(yè)部主管、中國動物衛(wèi)生與流行病學(xué)中心主辦，是我國動物防疫、檢疫領(lǐng)域唯一的國家級指導(dǎo)性科技期刊，多次榮獲國家級各類獎項(xiàng)，是農(nóng)業(yè)部重點(diǎn)宣傳媒介，全國畜牧獸醫(yī)類優(yōu)秀期刊。本刊著重宣傳我國動物衛(wèi)生領(lǐng)域的政策、法規(guī)、標(biāo)準(zhǔn)以及管理、科研成果、技術(shù)創(chuàng)新，并跟蹤國際最新動態(tài)，為我國動物衛(wèi)生事業(yè)服務(wù)，促進(jìn)我國畜牧業(yè)健康發(fā)展，為確保畜產(chǎn)品安全獻(xiàn)計獻(xiàn)策。
復(fù)方消毒劑的主要有效成分是過氧乙酸，其噴霧消毒的氨氣降低效果以及對消毒效果的影響尚不清楚。本試驗(yàn)旨在通過測定不同復(fù)方消毒劑劑量、不同噴霧作用時間的氨氣濃度以及不同氨氣濃度下的殺菌率，確定最低有效濃度的復(fù)方消毒劑對氨氣的中和效果，以及高濃度氨氣對其殺菌效果的影響，以期為該消毒劑的推廣使用提供依據(jù)。
1 材料與方法
1.1 試驗(yàn)材料
1.1.1 試劑與菌株 復(fù)方消毒劑(批號202001)，來自山西農(nóng)業(yè)大學(xué)動物醫(yī)學(xué)學(xué)院獸醫(yī)病理實(shí)驗(yàn)室;甘氨酸(批號916S066)、卵磷脂(批號601l024)，Solarbio公司產(chǎn)品;吐溫80(批號301C053)，天津市化學(xué)試劑三廠產(chǎn)品;硫代硫酸鈉(批號800628-2)，天津市天力化學(xué)試劑有限公司產(chǎn)品;普通營養(yǎng)瓊脂(批號00008-20190910)、普通肉湯瓊脂培養(yǎng)基(批號00007-20170627)，青島海博生物技術(shù)有限公司產(chǎn)品;氨水(批號201909)，天津市登豐化學(xué)品有限公司產(chǎn)品;白色葡萄球菌8032，山西農(nóng)業(yè)大學(xué)動物醫(yī)學(xué)學(xué)院獸醫(yī)病理實(shí)驗(yàn)室保存。
1.1.2 儀器及設(shè)備 氣霧柜，山西農(nóng)業(yè)大學(xué)動物醫(yī)學(xué)學(xué)院獸醫(yī)病理實(shí)驗(yàn)室自制;全自動高壓滅菌鍋(型號HVE-50)，日本三洋集團(tuán)產(chǎn)品;微量加樣器(型號eppendorf)，ThermoElectron公司產(chǎn)品;超凈工作臺(型號SW-CJ-1F)，北京昌平長城空氣凈化工程公司生產(chǎn);隔水恒溫箱(型號ZXGP-A2050)，上海智城分析儀器制造有限公司產(chǎn)品;液體撞擊式微生物氣溶膠采樣器(型號JWL-6)，金壇市華邦電子儀器有限公司產(chǎn)品;電子天平(型號AR124CN)，奧豪斯公司生產(chǎn);電動氣溶膠噴霧器(型號K-3)，上海羅迪公司生產(chǎn);氨氣測定儀(型號SGA-600-NH3)，深圳市深國安電子科技有限公司產(chǎn)品。
1.2 試劑配制
1.2.1 標(biāo)準(zhǔn)硬水配制 稱取氯化鈣(CaCl2)0.0608g和氯化鎂(MgCl2·6H2O)0.0278g，然后加去離子水至200mL，完全溶解后121℃壓力蒸氣滅菌20min以備使用。
1.2.2 復(fù)方消毒劑配制 取4mL復(fù)方消毒劑用滅菌標(biāo)準(zhǔn)硬水做2倍系列倍比稀釋，直至稀釋倍數(shù)為512倍。
1.2.3 采樣液配制 稱取0.50g甘氨酸、0.10g卵磷脂、0.50g吐溫80、0.25g硫代硫酸鈉、1.80g普通肉湯瓊脂定容至100mL，于121℃高壓滅菌20min以備用。
1.3 試驗(yàn)方法
1.3.1 氨氣中和試驗(yàn) 依據(jù)消毒技術(shù)規(guī)范[12]中的空氣消毒試驗(yàn)操作程序，調(diào)節(jié)對照組和試驗(yàn)組氣霧柜的溫度為20~25℃，相對濕度為50%~70%。將0.5cm口徑噴槍壓力設(shè)定為0.5kPa，噴霧流量為5mL/min，向氣霧柜內(nèi)噴霧1mL25.0%的氨水，使氣霧柜內(nèi)氨氣質(zhì)量濃度為40.98mg/m3。待傳感器的氨氣質(zhì)量濃度顯示值穩(wěn)定后(30min)，將不同劑量(7.5、15.0、30.0mL)512倍稀釋的復(fù)方消毒劑或滅菌去離子水噴霧于氣霧柜內(nèi)，記錄5、10、20、30min時的氨氣質(zhì)量濃度，并計算氨氣中和率，重復(fù)3次。氨氣中和率的計算方法：氨氣中和率=(消毒前氨氣質(zhì)量濃度-消毒后氨氣質(zhì)量濃度)/消毒前氨氣質(zhì)量濃度×100%。
1.3.2 消毒效果影響試驗(yàn)
按照1.3.1中的方法調(diào)節(jié)氣霧柜，向氣霧柜內(nèi)噴霧不同劑量(1.0、1.3、1.6mL)25.0%的氨水，待氣霧柜內(nèi)傳感器的氨氣質(zhì)量濃度顯示值穩(wěn)定后(30min)，將5×106cfu/mL白色葡萄球菌懸液5mL均勻噴霧于氣霧柜中，邊噴霧染菌邊開啟風(fēng)扇攪拌(使氣溶膠均勻分散)，噴菌結(jié)束后再攪拌5min;靜置5min后，對氣霧柜使用添加中和劑的液體撞擊式采樣器進(jìn)行消毒前采樣，采樣液10mL，采樣流量7mL/min，采樣8min。消毒前采樣后，將15mL/m3的512倍稀釋的復(fù)方消毒劑噴霧于氣霧柜內(nèi)，同時另一氣霧柜以等劑量滅菌去離子水作為對照，密閉作用至規(guī)定時間(10、20和30min)采樣，同時記錄這3個時間點(diǎn)的氨氣質(zhì)量濃度。采樣結(jié)束后，以5mL未使用的采樣液沖洗采樣瓶，沖洗液與已收集的10mL采樣液混合均勻后，吸取1mL接種于營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，37℃培養(yǎng)18h(各時間段樣本均接種兩個平皿)。
2 結(jié)果與分析
2.1 氨氣中和效果
3次重復(fù)試驗(yàn)結(jié)果(表1)顯示：512倍稀釋的復(fù)方消毒劑或滅菌去離子水噴霧劑量≥15mL/m3，作用5min時，氨氣質(zhì)量濃度開始下降;隨著噴霧劑量的增加和作用時間的延長，氨氣中和率逐漸增大。當(dāng)512倍稀釋的復(fù)方消毒劑噴霧劑量達(dá)到60mL/m3，作用30min時，氨氣中和率可達(dá)54.0%。
2.2 消毒效果影響
消毒效果試驗(yàn)結(jié)果(表2)顯示：隨作用時間延長，氣霧柜內(nèi)氨氣質(zhì)量濃度逐漸降低;隨著氨氣質(zhì)量濃度的增加，復(fù)方消毒劑的消毒效果出現(xiàn)下降，而作用時間延長又使消毒效果增加。在氨氣質(zhì)量濃度達(dá)到40.98mg/m3，作用30min時，復(fù)方消毒劑對白色葡萄球菌氣溶膠的殺滅率>99.9%，消毒效果合格;在氨氣質(zhì)量濃度>40.98mg/m3、作用30min時，消毒劑未達(dá)到合格消毒效果。
3 討論
多項(xiàng)研究顯示，有多種消毒劑可降低畜舍內(nèi)氨氣含量，效果也較好。崔東安[13]等將藍(lán)光消毒劑(主要成分為二氧化氯)1:1000稀釋噴霧消毒，分別作用4、8h后，氨氣質(zhì)量濃度可由30.36mg/m3降至5.31mg/m3，中和率為82.5%。孫天竹等[14]在不同條件下檢測木醋液(主要成分為乙酸)對禽舍的除臭效果(臭氣成分以氨氣為主)，發(fā)現(xiàn)用60%的木醋液作用于雞舍污泥16h以上，氨氣中和率可達(dá)60%，除臭效果最佳。黃炎坤[15]等研究表明：噴灑0.5%過氧乙酸溶液作用3h后，可將12.86mg/m3氨氣中和至4.62mg/m3，中和率為64.1%;噴灑0.5%過氧乙酸溶液作用6h后，細(xì)菌總數(shù)會出現(xiàn)明顯降低，殺菌率為46.6%。
本研究顯示，512倍稀釋的復(fù)方消毒劑噴霧量為15mL/m3，在氨氣質(zhì)量濃度≤40.98mg/m3，作用30min時，對白色葡萄球菌的殺滅率可達(dá)100%，可將氨氣質(zhì)量濃度從40.98mg/m3降至27.60mg/m3，除氨效果明顯，消毒合格。但當(dāng)氨氣質(zhì)量濃度達(dá)到48.57mg/m3以上，作用30min時，消毒則不合格，表明512倍稀釋的復(fù)方消毒劑進(jìn)行空氣消毒時，若想達(dá)到理想的消毒效果，氨氣的質(zhì)量濃度須小于40.98mg/m3。
本研究表明：在氨氣質(zhì)量濃度40.98mg/m3，作用30min后，512倍稀釋的復(fù)方消毒劑，噴霧劑量60mL/m3可實(shí)現(xiàn)理想的中和氨氣效果，15mL/m3可實(shí)現(xiàn)理想的消毒效果。——論文作者：田永清1，廖夏露2，鄭明學(xué)2，康慧鑫2，段步婷2