發(fā)布時間：所屬分類：醫(yī)學(xué)職稱論文瀏覽：1次
摘 要： 摘 要：使用A型和B型兩種不同的明膠制備止血微球，對比其對兔耳緣靜脈和兔肝創(chuàng)面止血的效果。采用水油乳化法制備明膠止血微球，并用低濃度的戊二醛溶液對其交聯(lián);通過吸水率、體外全凝血實驗、兔耳緣靜脈和兔肝創(chuàng)面止血實驗對比了兩種明膠微球止血效果上的差
摘 要：使用A型和B型兩種不同的明膠制備止血微球，對比其對兔耳緣靜脈和兔肝創(chuàng)面止血的效果。采用水油乳化法制備明膠止血微球，并用低濃度的戊二醛溶液對其交聯(lián);通過吸水率、體外全凝血實驗、兔耳緣靜脈和兔肝創(chuàng)面止血實驗對比了兩種明膠微球止血效果上的差異。結(jié)果表明：B型明膠微球吸水率更高、凝血效果更好、兔耳緣靜脈和兔肝創(chuàng)面止血時間更短;兩種明膠微球都能促進(jìn)止血，但B型明膠微球止血效果優(yōu)于A型明膠微球。
關(guān)鍵詞：明膠;微球;止血
1概述
失血是導(dǎo)致傷者在意外事故中死亡的主要原因之一[1]。戰(zhàn)爭和突發(fā)性的自然災(zāi)害造成的死亡人群中，有90%以上都與未能及時止血有關(guān)[2]。一般成年人總血量為4000mL左右，當(dāng)失血達(dá)到人體總血量的1/3時就會出現(xiàn)休克，當(dāng)失的血液達(dá)到人體總血量的一半時，人體的各個組織或者器官就會嚴(yán)重受損，如果得不到救治很快就會導(dǎo)致死亡。所以止血在突發(fā)意外和手術(shù)過程中顯得尤為的重要。
明膠，膠原水解之后的一類蛋白質(zhì)，是一種天然的高分子材料。它是有特定的氨基酸序列構(gòu)成，并且明膠中甘氨酸、脯氨酸和羥脯氨酸的含量很高，在結(jié)構(gòu)上，明膠分子還包含重復(fù)的甘氨酸-X-Y結(jié)構(gòu)，其中X、Y為脯氨酸或羥脯氨酸。所以明膠分子中含有大量的羥基羧基和氨基，具有較強的吸水能力，明膠繼承了膠原很多的特殊性質(zhì)，如：可生物吸收性，生物相容性，易加工性，并且明膠分子有許多暴露的活性側(cè)基，化學(xué)反應(yīng)活性很高，這就使得明膠很容易進(jìn)行化學(xué)改性。從1945年Correll和Wise首次將明膠作為止血敷料用于臨床手術(shù)中以后，明膠作為一種具有止血效果的生物材料，開發(fā)出了許多各類形態(tài)的止血材料，如：纖維網(wǎng)狀、多孔海綿狀、薄膜狀等。
相關(guān)期刊推薦：《化工設(shè)計通訊》(雙月刊)創(chuàng)刊于1975年，由湖南化學(xué)工業(yè)設(shè)計院主辦。發(fā)行范圍遍及全國各省、市、自治區(qū)化工主管部門、設(shè)計院、科研院(所)、化肥企業(yè)、化工企業(yè)、大專院校、圖書館及各信息部門。報道化工產(chǎn)品的設(shè)計、科研、生產(chǎn)、建設(shè)、技改等方面的新工藝、新材料、新產(chǎn)品、新設(shè)備、新技術(shù)。主要特色：以化肥及相關(guān)產(chǎn)品為主，兼顧無機化工、石油化工、醫(yī)藥及學(xué)術(shù)研究和工程設(shè)計項目信息報道等。榮獲化工系統(tǒng)優(yōu)秀信息成果二等獎、化工行業(yè)優(yōu)秀科技期刊。
本研究采用水油乳化法制備明膠微球，并使用戊二醛作為交聯(lián)劑改善其熱學(xué)及化學(xué)穩(wěn)定，通過體外凝血實驗、兔耳緣靜脈和兔肝創(chuàng)面止血實驗研究了兩種不同類別的明膠(A型和B型明膠)制備的微球的止血效果。
2材料與方法
2.1試劑及儀器
A型明膠(gelatintapeA)和B型明膠(gelatintypeB)：Sigma進(jìn)口分裝;50%戊二醛、丙酮、異丙醇、span-80和液體石蠟：成都科龍化工試劑廠;電子天平，型號BSA224S：塞多利斯科學(xué)儀器有限公司;電動攪拌機：江蘇省金壇市鴻科儀器廠。
2.2實驗方法
2.2.1明膠微球的制備
采用水油乳化法制備明膠微球。將1g明膠在45℃下溶于10mL去離子水中得到明膠溶液，將明膠溶液滴入45℃的300mL液體石蠟中同時加入9mLspan-80，攪拌15min，攪拌速度1000r/min。隨后冰水浴15min使溫度降至10℃以下。過濾并用丙酮和異丙醇交替洗滌6次，室溫烘干后用10mol/L的戊二醛溶液交聯(lián)8h，最后再使用丙酮和異丙醇交替洗滌6次得到明膠微球。
2.2.2掃描電鏡觀察明膠微球形貌
樣品表面噴金，使用掃描電鏡(日本HITACHIS-4800)觀察微球形貌。
2.2.3體外全凝血測定
體外全凝血的測定采用Gu等的方法。將處理好的抗兔凝血液從冰箱中取出，在37℃的水浴中孵浴，待完成后用移液槍取200µL放入潔凈的10mL塑料離心管，分別加入稱量好的0.1g的試樣，不加任何材料的作為空白組，每一份樣品設(shè)三支離心管。將各管中的血液與樣品輕輕搖勻，使得血液都在試管的底部，取20µL氯化鈣溶液滴加入離心管中并開始進(jìn)行凝血計時，分別在時間刻度為60s，120s，240s時計時完畢。之后加入去離子水10mL，待上下振動離心管3次，穩(wěn)定后吸取上清液100µL于96孔板中。用紫外分光光度計在波長540nm處測其吸光度。
2.2.4兔耳緣靜脈止血
取體重為2~2.5kg的新西蘭大白兔按照30mg/kg的劑量，采用3%的戊巴比妥鈉麻醉劑靜脈注射對其麻醉然后固定四肢。使用脫毛劑處理兔子耳背面的毛發(fā)，暴露耳靜脈。用碘酒和醫(yī)用消毒酒精對耳朵背部消毒后，將耳緣靜脈橫切切斷，在自由出血3s后，用滅菌紗布輕輕的將耳朵傷口上的浮血擦去，并立刻將明膠微球撒在傷口處，每15s觀察一次，直到傷口不再出血為止，記錄出血時間。自然止血組不作任何止血處理，同樣待不再滲血后記錄出血時間。每組實驗重復(fù)三次。
2.2.5兔肝創(chuàng)面止血
取體重為2-2.5kg的新西蘭大白兔按照30mg/kg的劑量，采用3%的戊巴比妥鈉麻醉劑靜脈注射對其麻醉然后固定四肢。使用脫毛劑處理下兔子腹部的毛發(fā)，用碘酒和醫(yī)用消毒酒精對腹部手術(shù)部位消毒后，于兔子的腹中線作一長約5cm縱行切口，暴露肝臟，用刀片在肝臟中葉切1cm×1cm，深0.5cm的十字型傷口，在自由出血3s后，用滅菌紗布將傷口上的浮血輕輕擦去，并立刻將明膠微球撒在傷口處，每15s觀察一次，直到傷口不再出血為止，記錄出血時間。自然止血組不作任何止血處理，同樣待不再滲血后記錄出血時間。每組實驗重復(fù)三次。
2.2.6數(shù)據(jù)分析
采用SPSSStatistics17.0軟件進(jìn)行ANOVA分析，實驗數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，組間比較采用t檢驗分析P<0.05為差異有顯著性意義，用**代表差異P<0.01。
3結(jié)果與討論
3.1明膠微球形貌
圖1A和1B分別是A型和B型明膠微球形貌SEM圖，微球球形度好，并且表面光滑無明顯團聚現(xiàn)象，且A，B型明膠微球粒徑在為10~30μm。
3.2體外全凝血實驗
OD值是表示被檢測樣品溶液吸光度的物理量，吸光度越低代表上清液中殘留的血細(xì)胞越少，說明樣品的凝血性能更好。如圖2所示，在第1、2和4min時，兩種明膠微球的凝血性能都優(yōu)于空白對照組，且B型明膠微球的凝血性能優(yōu)于A型明膠微球，這說明明膠微球有利于促進(jìn)血液的凝固從而達(dá)到快速止血。
3.3耳緣靜脈止血
如圖3A所示是兩種微球耳緣靜脈止血時間，A型和B型明膠微球的止血時間分別為64s和55s，且顯著低于空白組的止血時間，表明兩種明膠微球?qū)ν枚夓o脈出血有明顯的止血效果。由于B型明膠微球的吸水率更高和帶有更多的負(fù)電荷，B型明膠微球的止血時間要高于A型明膠微球，這表明止血時間與吸水率和表面負(fù)點電荷的多少呈正相關(guān)關(guān)系。這可能是由于微球表面的負(fù)電荷能誘導(dǎo)凝血FXⅡ因子的激活和促進(jìn)它激活。圖3B是使用B型明膠微球止血完畢后的照片，止血完成后，未見微球被血液浸濕，說明微球有良好的止血效果。
3.4兔肝創(chuàng)面止血
如圖4A所示是兩種微球兔肝臟創(chuàng)面止血時間，A型和B型明膠微球的止血時間分別為125s和114s，且顯著低于空白組的止血時間，表明兩種明膠微球?qū)ν酶闻K創(chuàng)面出血有明顯的止血效果。這與上述兔耳緣靜脈止血實驗結(jié)果相符。圖4B是B型明膠微球止血后的效果圖，可以看到，止血完畢后微球緊緊黏在肝臟表面并形成了類似糊狀的基質(zhì)，由此封堵住傷口，達(dá)到止血。且傷口表明微球未被血液浸濕，表明微球有良好的止血效果。
4結(jié)束語
明膠在人體溫環(huán)境下就會溶解，所以適當(dāng)交聯(lián)以提高其化學(xué)和熱學(xué)穩(wěn)定，使之能應(yīng)用于人體溫環(huán)境。制得的明膠微球粒徑為10~30μm，表面光滑，成球性良好。從體外凝血和體內(nèi)止血效果上看，B型明膠明膠微球都優(yōu)于A型明膠微球，其主要的原因是由于B型明膠微球有較高的吸水率，使得B型明膠微球能更快吸收血液中的水分凝聚血小板和紅細(xì)胞并形成物理性封堵，從而提高其止血效果。